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內容簡介: |
生物化学实验分九章共63个实验项目,包括糖类物质的检测与分析、脂类物质的检测与分析、氨基酸的检测与分析、蛋白质的分离制备与分析、酶的分离制备与分析、维生素的检测分析、核酸的分离与分析、综合性与设计性实验等常用生物化学实验内容。另外还介绍了生物化学实验的基本知识与基本操作,并在最后附上生物化学实验中常用参数,供实验中参考。
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目錄:
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目录
第一章实验基本知识与基本操作1
第一节生物化学实验室规则1
第二节实验室安全和防护知识2
第三节基础实验操作技能6
第三节实验误差与提高实验准确度的方法39
第四节实验记录与实验报告44
第二章糖类物质的检测与分析48
第一节糖的呈色反应和还原糖的检验48
第二节苯酚硫酸法测定总糖浓度50
第三节还原糖的测定——3,5二硝基水杨酸比色法52
第四节粗淀粉的测定——1%盐酸旋光法54
第五节血糖的测定57
Ⅰ磷钼酸比色法57
Ⅱ蒽酮比色法59
Ⅲ葡萄糖氧化酶过氧化物酶法GODPOD法61
第六节糖酵解中间产物的鉴定63
第七节可溶性糖的硅胶G薄层层析65
第三章脂类物质的检测与分析68
第一节粗脂肪含量的测定——索氏抽提法68
第二节脂肪酸值的测定——碱滴定法69
第三节油脂皂化与皂化值的测定72
第四节碘价的测定Hanus法73
第五节血清胆固醇的测定75
Ⅰ化学比色法75
Ⅱ酶法76
第六节卵磷脂的提取与鉴定78
第七节脂肪酸的β氧化80
第四章氨基酸的检测与分析83
第一节纸层析法分离鉴定氨基酸83
第二节甲醛滴定法测定氨基氮含量85
第三节瓦氏呼吸仪法测定L谷氨酸的含量87
第五章蛋白质的分离制备与分析91
第一节蛋白质的两性反应与等电点的测定91
第二节蛋白质的沉淀反应、颜色反应及电荷的测定93
第三节蛋白质含量测定一——微量凯氏定氮法97
第四节蛋白质含量测定二101
Ⅰ双缩脲法101
Ⅱ考马斯亮蓝G250法Bradford法104
ⅢFolin试剂法106
BCA法108
Ⅴ紫外UV吸收测定法109
第五节酪蛋白的制备112
第六节凝胶层析法分离蛋白质113
第七节血红蛋白的凝胶过滤115
第八节蛋白质相对分子质量的测定SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法118
第九节血清蛋白质乙酸纤维薄膜电泳126
第六章酶的分离制备与分析130
第一节酶的特性——底物专一性130
第二节pH值对酶活性的影响132
实验三温度对酶活性的影响133
第四节脲酶米氏常数的测定135
第五节糖化型淀粉酶活力的测定138
第六节脂肪酶活性测定140
第七节乳酸脱氢酶活力的测定142
第八节大麦萌发前后淀粉酶活力的测定144
第九节发色底物测定大曲中α1,4葡萄糖苷酶活力147
第七章维生素的检测分析150
第一节维生素B1的荧光测定150
第二节维生素B2的测定152
第三节植物中抗坏血酸含量的测定155
第四节维生素A的测定156
第八章核酸的分离与分析160
第一节哺乳动物基因组DNA的提取160
第二节植物基因组DNA的提取162
第三节植物总RNA的提取与电泳165
第四节酵母RNA的分离与组分鉴定167
第五节组织和细胞RNA的制备170
第六节核苷酸的纸电泳172
第七节紫外分光光度法测定核酸的含量174
第八节RNA与DNA的测定176
第九节DNA的琼脂糖凝胶电泳179
第十节质粒DNA的微量制备碱裂解法、煮沸法182
第十一节质粒DNA的酶切鉴定及琼脂糖凝胶电泳187
第十二节质粒DNA的大量制备与纯化189
第十三节大肠杆菌感受态细胞的制备与转化193
第十四节PCR基因扩增198
第九章综合性与设计性实验200
第一节鸡卵类黏蛋白的分离纯化200
第二节纤维素酶活性测定及pH值对其活性的影响205
第三节酪氨酸酶的提取及其催化活性研究208
第四节酵母蔗糖酶的纯化及性质研究212
Ⅰ酵母蔗糖酶的提取与纯化212
Ⅱ蔗糖酶Km值测定及脲的抑制作用213
ⅢpH值对酶活性的影响和最适pH值的测定217
Ⅳ温度对酶活性的影响和反应活化能的测定220
第五节固定化酵母细胞及蔗糖酶活性的检测222
第六节温度、pH值、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响224
第七节溶菌酶结晶的制备及活性测定226
第八节转基因农产品的PCR检测230
第九节橘皮果胶的提取及果冻的制备235
第十节发酵过程中无机磷的利用和ATP的生成236
附录实验室中常用参数239
参考文献240
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內容試閱:
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前言
生命科学在20世纪有了惊人的发展,并已经成为当今世界三大发展最快的现代科学之一。生物化学是生命科学领域中的重要组成部分,也是较为活跃的学科之一。作为一门以实验为基础的学科,生物化学实验方法和研究技术成为推动生物化学发展的重要动力。加强与提高生物化学实验技术的研究与教学,对生物化学课程的学习具有重要作用。与传统生物化学实验内容相比,当今生物化学研究更多地涉及生命现象的本质与化学基础,并广泛探讨生物分子结构与功能的关系、信息传递过程及基因表达调控的规律等,这使得现代生物化学实验研究与教学在内容上更加深入,更加广泛。
为了适应学科的发展及 “十二五”期间我国高等教育改革的需要,充分体现学科发展状况,体现素质教育、创新教育及个性教育的思想,围绕“培养高素质、宽口径人才”的目标,提高教学水平和教学质量,并结合近年来生物化学实验技术和方法的发展及实验室条件,在华中科技大学出版社的协调与组织下,相关院校共同编写了适合普通院校使用的生物化学实验教材,以适应当今生物化学学科发展的需要。
本书适合作为普通高等院校各类理工科专业的生物化学实验课教材或参考书。
本书由刘志国主编。参加本书编写的有:武汉轻工大学刘志国、刘军、阎达中,青岛科技大学于建生、刘杰、李红芳,湖北工业大学陈雄、王金华、吴正奇,武汉生物工程学院廖贵芹,陕西科技大学李敏康、宋宏新,大连工业大学金朝霞,陕西理工学院田光辉,西华大学车振明、李明元,信阳农林学院王欣、赵丽萍、张耀州。武汉轻工大学生物技术教研室的其他老师丁洪波、曾万勇、吕玲肖等也参加了部分校订工作。华中科技大学出版社对本书的编写给予了大力支持与帮助,在此表示衷心的感谢。
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