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| 編輯推薦： |
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医学,免疫学,实验,医学院校,教材,病原微生物,实验,医学院校,教材
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| 內容簡介： |
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《医学免疫学与病原生物学实验》将原属于医学免疫学、医学微生物学和人体寄生虫学实验教学的内容进行了科学合理的整合。依据学科特点，《医学免疫学与病原生物学实验》分为四篇，**篇病原生物学实验室常用仪器设备及试剂；第二篇经典实验，旨在培养学生实验操作的基本功，加深巩固对理论知识的理解和掌握；第三篇开放及融合实验，力图将不同学科的知识点有机融合于一个或多个实验项目中，以培养学生综合分析问题及解决问题的能力；第四篇创新实验，通过引导学生进行课题设计，使学生了解科研工作的基本程序，培养学生的团队协作意识和创新精神，最终达到提高综合素质的目的。
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| 目錄：
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目录
**篇 病原生物学实验室常用仪器设备及试剂
**章 常用仪器设备的使用 1
第二章 常用试剂及配制 17
第二篇 经典实验
**章 医学免疫学经典实验 23
实验一 ABO血型鉴定 23
实验二 试管凝集试验 24
实验三 间接胶乳凝集试验检测类风湿因子 25
实验四 单向琼脂扩散试验 26
实验五 双向琼脂扩散试验 27
实验六 对流免疫电泳 29
实验七 火箭免疫电泳 30
实验八 免疫电泳 31
实验九 总补体溶血活性测定（CH50测定）32
实验十 补体溶血实验 33
实验十一 豚鼠过敏实验 34
实验十二 肥大细胞脱颗粒实验 35
实验十三 ELISA双抗体夹心法检测AFP 35
实验十四 间接免疫荧光法检测ANA 37
实验十五 放射免疫分析测定血清三碘甲状腺原氨酸（T3）39
实验十六 胶体金免疫层析试验测定HCG 40
实验十七 免疫印迹法检测ENA自身抗体 41
第二章 医学微生物学经典实验 46
实验一 细菌的形态学检查 46
实验二 细菌的分离培养 52
实验三 细菌的分布 56
实验四 外界因素对细菌的影响 57
实验五 细菌的变异性试验 60
实验六 化脓性球菌 62
实验七 肠杆菌科 64
实验八 结核分枝杆菌 68
实验九 厌氧性细菌 69
实验十 棒状杆菌属及芽孢杆菌属 71
实验十一 支原体的形态观察 72
实验十二 螺旋体形态观察及血清学试验 72
实验十三 真菌学实验 75
实验十四 病毒的形态学观察 77
实验十五 病毒的培养 78
实验十六 PCR检测血清中乙型肝炎病毒DNA 81
第三章 人体寄生虫学经典实验 84
实验一 蛔虫和鞭虫 84
实验二 钩虫、蛲虫和旋毛虫 85
实验三 肝吸虫、肺吸虫、血吸虫、姜片虫及其他 87
实验四 带绦虫、细粒棘球绦虫及曼氏迭宫绦虫 91
实验五 溶组织内阿米巴、阴道毛滴虫及蓝氏贾第鞭毛虫 93
实验六 间日疟原虫 96
实验七 恶性疟原虫、弓形虫及隐孢子虫 99
实验八 医学节肢动物 100
第三篇 开放及融合实验
实验一 人外周血T细胞亚群检测 103
实验二 小鼠溶血空斑形成实验 104
实验三 NK细胞功能测定 105
实验四 巨噬细胞吞噬功能测定 106
实验五 中性粒细胞吞噬功能检测 107
实验六 脓标本中致病菌的分离和鉴定 107
实验七 粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定 109
实验八 尿液标本中细菌的分离与鉴定 110
实验九 手足口病的病原学检测 112
实验十 粪便中常见寄生蠕虫卵及医学原虫包囊检查 113
实验十一 自生阿米巴检查 114
实验十二 卡氏肺孢子虫病原学检查及包囊图像分析 115
实验十三 医学生蠕形螨感染情况调查 116
第四篇 创新实验
附件 118免费在线读**篇 病原生物学实验室常用仪器设备及试剂
**章 常用仪器设备的使用
本章主要介绍病原生物学实验室常用仪器设备的基本工作原理、使用方法及注意事项等，为更好地服务于实验教学、科学研究奠定基础。
一、显微镜
显微镜是一种能够把人肉眼不能识别的微细结构放大成像的精密仪器，已广泛应用于生命科学、物理学、化学及材料学等领域。显微镜种类繁多，分为光学显微镜、电子显微镜、扫描隧道显微镜、原子力显微镜、声学显微镜及热波显微镜等，其结构和原理各不相同。其中普通光学显微镜是病原生物学实验中观察形态的常用设备，它以自然光或电光源作为照明源，采用光学透镜组放大成像，分辨率达0.2μm。
随着时代的发展及科学技术的进步，普通光学显微镜的设计和制作更注重实用性和多功能性的改进，在装配设计上趋于采用组合方式，集普通光镜、相差、荧光、暗视野、摄影装置等于一体，多种技术相结合，从而更加方便、实用。下面简要介绍实验室中几种常见的普通光学显微镜的基本原理、使用方法和注意事项等。
（一）生物显微镜
生物显微镜在病原生物学实验教学中*为常用，它由机械装置和光学系统两大部分构成，机械部分包括镜筒、物镜转换器、粗准焦螺旋、细准焦螺旋、载物台、镜座、镜臂等；光学系统的主要部件有物镜、目镜、聚光镜、照明光源等（图1-1-1）。其中，物镜是显微镜中的一个*重要部分，由很多透镜组合而成，决定着显微镜的分辨率和成像质量。物镜的分辨率可用公式表示 d=0.61λN.A.，公式中 d表示物镜分辨的*短距离，λ表示照明光线波长， N.A.表示物镜的数值孔径。根据公式可以得知波长越短，数值孔径越大，显微镜分辨率越高。另外，物镜的外壳上标记着该物镜特殊性能的符号及四个数字，标志物镜性能的符号很多，各厂家也不一致，如“ Splan Apo 100”表示物镜的类型是超平场复消色差物镜和放大倍数100倍，“1.40oil”表示数值孔径1.40，该镜头为油镜，“1600.17”表示使用的显微镜机械筒长度160mm及所用盖玻片厚度为0.17mm。有一些物镜中间还有一个可调节的环，如果是带有数字刻度的，可以根据盖玻片的实际厚度调节至相应位置，修正盖玻片厚度不一导致的成像差别；如果是无刻度的，可以调图1-1-1生物显微镜结构节物镜内光圈的大小。
【基本原理】生物显微镜的基本原理是利用光学透镜把标本的细微结构放大成像，达到人眼所能识别的程度。标本位于物镜下方大于1倍焦距小于2倍焦距的位置，经物镜一级放大后形成放大倒立的实像，该像落在目镜焦距内，再经目镜二次放大，在像的同侧又形成放大正立的虚像。此时通过目镜观察，可以看到放大的标本的像。
病原生物学实验中进行细菌形态观察时常用的物镜是放大100倍的油镜，与低倍镜和高倍镜相比，油镜放大倍数高而镜头很小，照明光线透过标本片后发生折射，由于空气的折射率小于玻璃的折射率，一部分光线就会受到损失，因此进入物镜的光线减少，物像变得暗而不清晰。如果在油镜和玻片之间滴加与玻璃折光率（n=1.52）相似的香柏油（n=1.515）、丙三醇（n=1.475）或液体石蜡（n=1.471），将镜头浸在里面，透过玻片的光线几乎不发生折射，进入物镜的光线增多，物像就会变得明亮而清晰。
【使用方法】
1.低倍镜、高倍镜的使用
（1）准备：显微镜置于平稳台面上，镜检者姿势端正，适当调整座位高低。
（2）对光：先将低倍镜转到工作位置，对准载物台上的通光孔，上升聚光镜，打开光圈，使视野内的光线均刀明亮。如果检查未染色标本，应适当缩小光圈并降低聚光镜，使亮度减弱，利于用高倍镜观察细菌的运动。
（3）放置标本片：将标本片放在载物台上，调节标本夹移动手轮，将待检部位移至通光孔位置。
（4）低倍镜观察：顺时针转动粗准焦螺旋使物镜镜头下降，贴近玻片，然后逆时针转动粗准焦螺旋使镜头缓慢上升，有模糊物像出现时，调节细准焦螺旋直到看到清晰的物像，在低倍镜下观察。
（5）高倍镜观察：在低倍镜下找到观察视野，转动物镜转换器换高倍镜，调节细准焦螺旋，直到视野中出现清晰物像，高倍镜下观察。
（6）放大率计算：显微镜放大率等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积。
2.油镜的使用
（1）油镜使用前先用低倍镜对光，将光圈完全打开，聚光镜上升至与载物台平齐，使视野明亮。
（2）将染色标本片用标本夹固定到载物台上，将待检部位移至通光孔位置。
（3）调整油镜头，在待检部位滴加一滴香柏油，将油镜头浸在香柏油内，转动细准焦螺旋并从侧面观察，镜头几乎接近玻片时停止。
（4）观察目镜，逆时针缓慢调节粗准焦螺旋，出现模糊影像后，再调节细准焦螺旋，直到看到清晰的物像。
3.显微镜使用后的整理
（1）观察结束后，应立即用擦镜纸滴上几滴二甲苯擦拭油镜头。
（2）取下标本片，放入装有消毒液的玻片缸内。
（3）转动物镜转换器，使物镜与通光孔错开，使两个物镜摆放在通光孔两侧的位置。
（4）将显微镜电源明暗调节器调至*小位置并关闭电源，盖上显微镜防尘罩。
【注意事项】
1.不得随意拆卸显微镜。
2.油镜头使用完毕后，应立即用擦镜纸蘸取少许二甲苯擦去香柏油。
3.显微镜使用完毕，将镜头复位，下降聚光镜，电源明暗调节器调至*小并关闭电源，将显微镜盖上防尘罩。
4.显微镜不得接触强酸、强碱等化学药品，以免腐蚀显微镜。
5.显微镜存放在阴凉干燥的环境中。
（二）体视显微镜
体视显微镜又称立体显微镜、实体显微镜或解剖镜，放大倍数不高，可以直接在显微镜下观察实物，通过目镜看到的图像立体感很强而且细节清晰可辨，另外还可以进行连续变倍放大观察。在病原生物学实验中可利用体视显微镜观察寄生虫的标本。
【基本原理】体视显微镜的光学系统包括照明光源、初级物镜、变倍物镜、棱镜组和目镜。其成像的基本原理：首先通过初级物镜对实物成像，生成的像分别再通过左右两组变焦物镜放大，经棱镜组调整光束方向后进入目镜筒，*后通过目镜再次放大成像，该像方向与实物方向一致。由于左右目镜筒的两束光线存在夹角，相当于人眼观察物体时的视角，所以通过目镜看到的是一个立体感丰富的图像。
【使用方法】以江南永新 JSZ6体式显微镜为例（图1-1-2）。
1.打开显微镜电源开关，根据标本类型选择照明方式（反射光照明或透射光照明）。
2.调节瞳距。双手转动目镜筒，使两个目镜下看到的圆形视野重合为一个。
3.观察标本。标本放置在载物台圆盘上，将两个目镜屈光度调节环调至0位，将变倍旋钮转至**倍率处，从目镜中观察，转动对焦旋钮对焦；再将变倍旋钮旋转至**倍率处，通过调节两个目镜的屈光度调节环使物像清晰。重复上述调焦步骤直至齐焦。调好焦后，对标本可进行连续变倍观察。
4.观察结束，从载物台移走标本，整理好显微镜，盖上防尘罩。
【注意事项】
1.不要将观察对象直接置于载物台圆板上，应根据标本类型选择放在玻片上或托盘中，然后再置于载物台上。
2.不要随意拆卸显微镜组件。
3.显微镜放置在阴凉干燥的环境中。
（三）暗视野显微镜
暗视野显微镜是光学显微镜的一种，它是在普通光学显微镜结构的基础上将明视场聚光镜更换成暗视场聚光镜，**分辨率可达4nm，远高于普通光学显微镜。病原生物学实验中常用暗视野显微镜观察不染色微生物活体的形态和运动。
【基本原理】暗视场聚光镜内部有一个环形暗视场光阑，能够阻挡住光源发出的中央光束，四周透过的环形光线经过聚光镜聚焦后形成空心锥光，不能进入物镜，因此造成暗视场。当有标本存在时，斜射在待检标本上的空心锥光发生散射、衍射等现象，致使部分光线进入物镜，即可在暗背景上观察到亮的微粒像。
【使用方法】
1.打开显微镜电源开关，亮度调节器调到**，光圈完全打开。
图1-1-2 体视显微镜
2.标本玻片和暗视场聚光镜之间滴加一滴香柏油，标本片底面与香柏油接触，不要产生气泡。
3.选择所需物镜，在显微镜下进行观察。
4.观察结束后整理好显微镜，用擦镜纸擦除香柏油。
【注意事项】
1.显微镜电源亮度调至**，光圈调至**。
2.暗视野聚光镜与载玻片之间一定要滴加香柏油并使载玻片底面与香柏油接触，防止光线在聚光镜上发生全反射。
3.暗视场聚光镜数值孔径一定要大于物镜数值孔径。
4.盖玻片和载玻片应厚度适宜，符合显微镜厂家要求的标准。
5.盖玻片与载玻片应保持清洁干净并且无划痕。
（四）相差显微镜
相差显微镜是1935年荷兰科学家 Zernike发明的，它与普通光学显微镜的区别在于用相差物镜替代了普通物镜；用带环状光阑的聚光镜替代了带可变光阑的普通光学显微镜聚光镜；增加了一个合轴调中目镜以调整环状光阑与物镜中相位板圆环完全重合；采用了绿色滤光片产生绿光（单色光）照明来消除色差。在常规病原生物学教学实验和科研工作中，常用相差显微镜观察不染色透明标本或细胞在培养基中的生长情况。
【基本原理】相差显微镜利用了光的衍射和干涉原理。因为不染色标本内部各微细结构厚度不同，折光率也各不相同，当有光线通过时，衍射光和直射光就会产生相位差，人眼是无法感受到这种相位变化的，在普通光学显微镜下不会看到清晰物像，而对于相差显微镜，通过其特殊装置相差物镜内部的相位板及聚光镜的环状光阑，可以将这种相位差转变成人眼可见的振幅差（光的干涉），于是标本内部各微细结构呈现显著的明暗差异，通过目镜就可观察到清晰的物像。
【使用方法】
1.打开显微镜电源开关，选择绿色滤光片。
2.将标本置于载物台上，选择10×相差物镜在明视野下对焦。
3.选择与10×相差物镜相对应的环状光阑，将聚光镜光圈完全打开。
4.将环状光阑与物镜中相位板圆环进行合轴调节。具体方法：取下一个目镜并换上合轴望远镜，调节望远镜直到镜中环状光阑亮环和相位板暗环变得清晰，调节聚光镜调中部件使两环完全重合。
5.更换其他倍率的相差物镜及对应的环状光阑，同理进行合轴调节。
6.换回目镜进行观察。
7.观察结束，关闭电源并移走标本，整理好显微镜。
【注意事项】
1.光源调至适当亮度，聚光镜光圈完全打开。
2.相差物镜与环状光阑相匹配并进行合轴校对。
3.选择绿色滤光片可以更好地消除色差。
（五）荧光显微镜
荧光显微镜是一类特殊的光学显微镜，在医学及生物学等领域有着广泛应用。它是通过检测物质发出的荧光信号，观察该物质在组织或细胞中的分布、大小及形状等，为进一步研究其功能奠定基础。
荧光显微镜由光源、滤片系统及光学成像系统作为主要组件构成。光源多采用200W的高压汞灯，可发出一系列波长的光；滤片系统包括激发滤板、双色束分离器及压制滤板，激发滤板配有紫外、紫色、蓝色和绿色四种滤光片，可产生不同波长激发光，双色束分离器用来将激发光反射到物镜中，照射在样品上，同时将样品返回的荧光及激发光有效分离，压制滤板可以完全阻挡激发光进入目镜，允许产生的荧光通过；光学系统包括物镜、目镜、透镜组及聚光镜等物理器件，与普通光学显微镜的成像原理一样，对物像起一个放大作用。
荧光显微镜按照光路成像的不同，可分为透射式荧光显微镜和落射式荧光显微镜。透射式荧光显微镜是通过激发光穿过标本材料来激发荧光；落射式荧光显微镜是激发光从物镜向下照射到标本，同时该物镜收集荧光信号。现在常用的荧光显微镜是落射式荧光显微镜。
【基本原理】荧光显微镜
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